RESUMO
Sample preparation and DNA extraction protocols for DNA amplification by PCR, which can be applied in human fecal samples for taeniasis diagnosis, are described. DNA extracted from fecal specimens with phenol/chloroform/isoamilic alcohol and DNAzol reagent had to be first purified to generate fragments of 170 pb and 600 pb by HDP2-PCR. This purification step was not necessary with the use of QIAmp DNA stool mini kit. Best DNA extraction results were achieved after eggs disruption with glass beads, either with phenol/chloroform/isoamilic alcohol, DNAzol reagent or QIAmp DNA stool mini kit.
Assuntos
DNA de Helmintos/química , Fezes/parasitologia , Manejo de Espécimes/métodos , Taenia saginata/genética , Taenia solium/genética , Teníase/diagnóstico , Animais , DNA de Helmintos/isolamento & purificação , Eletroforese em Gel de Ágar , Humanos , Reação em Cadeia da Polimerase , Especificidade da Espécie , Taenia saginata/classificação , Taenia solium/classificação , Teníase/parasitologiaRESUMO
Com o intuito de utilizar a Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) como método de diagnóstico diferencial da teníase humana, avaliaram-se alguns protocolos de preparação e extração de DNA de ovos de Taenia saginata presentes em amostras de fezes de paciente naturalmente infectado. O DNA obtido após extração com fenol/clorofórmio/álcool isoamílico ou DNAzol® teve que ser purificado antes da PCR para que fosse possível a amplificação dos fragmentos de 170 pb e 600 pb desejados. Com o kit QIAmp DNA stool mini kit® tal purificação não foi necessária. Os melhores resultados foram observados após o tratamento prévio das amostras com pérolas de vidro, tanto quando da utilização de fenol/clorofórmio/álcool isoamílico, quando de DNAzol® ou QIAmp DNA stool mini kit®.
Assuntos
Animais , Humanos , DNA de Helmintos/química , Fezes/parasitologia , Manejo de Espécimes/métodos , Taenia saginata/genética , Taenia solium/genética , Teníase/diagnóstico , DNA de Helmintos/isolamento & purificação , Eletroforese em Gel de Ágar , Reação em Cadeia da Polimerase , Especificidade da Espécie , Taenia saginata/classificação , Taenia solium/classificação , Teníase/parasitologiaRESUMO
The taeniasis-cysticercosis complex is a zoonosis of great medical and economic importance where humans play an important role as the carrier of adult stage of Taenia solium and Taenia saginata. This paper describes PCR standardization that can be applied in human fecal samples for taeniasis diagnosis. DNA extraction was achieved with DNAzol reagent, after egg disruption with glass beads. DNA prepared from fecal specimens was first purified and PCR amplified generating fragments of 170 and 600 bp. The assay described herein provides an important tool for T. saginata identification in human fecal samples.
